Nazwiska: Produkt pcr nakładamy na żel: Przenosimy 5ul produktu pcr do nowej probówki 0,2 ml



Pobieranie 8.85 Kb.
Data09.05.2016
Rozmiar8.85 Kb.

Dzień 3

Neurobiologia – Genetyka Medyczna

Grupa ćw.

Nazwiska:




1. Produkt PCR nakładamy na żel:

Przenosimy 5ul produktu PCR do nowej probówki 0,2 ml.

Dodajemy 5ul ddH2O

Dodajemy 3 ul barwnika fluorescencyjnego z buforem obciążającym.

Do 5 ul markera długości DNA dodajemy 10 ul barwnika fluorescencyjnego z buforem obciążającym.

2. Analiza produktu PCR na żelu agarozowym w świetle UV.

Wyłączyć zasilacz do elektroforezy gdy czoło żelu znajdzie się w 1/3 od końca żelu agarozowego.

Położyć żel na trans iluminator. Zrobić zdjęcie w programie KODAK. Wydrukować. Dokonać analizy jakościowej produktów . (WKLEIĆ ZDJĘCIE Z OPISEM)

3. TECHNIKA RFLP (RESTRICTION FRAGMENT LENGTH POLYMORPHISM)

Analiza produktu PCR dwoma enzymami restrykcyjnymi (Mnl I oraz Rsa I)

Do probówki PCR o objętości 0,2 ml dodać odmierzone objętości niżej wymienionych odczynników:

Dla reakcji cięcia enzymem MnlI:

20 ul matrycowego DNA

0,25 ul BSA

2,5 ul Medium Bufor

0,3 ul enzymu restrykcyjnego

ddH2O do objętości 25 ul___________

Dla reakcji cięcia enzymem RsaI:

20 ul matrycowego DNA

0,25 ul BSA

2,5 ul Low Buffor

0,2 ul enzymu restrykcyjnego

ddH2O do objętości 25 ul___________

Warunki reakcji:

Inkubacja z enzymem restrykcyjnym: 30 min w 37˚C

Dezaktywacja enzymu: 20 min w 65˚C

4. ELEKTROFOREZA AGAROZOWA

Przygotowanie 2% żelu agarozowego:

Agaroza: ______ g

Bufor TAEx1: 100ml (TRIS, EDTA, CH3COOH, pH8,5)

Odmierzoną agarozę połączyć z buforem, zagotować do rozpuszczenia agarozy i ochłodzić.

Przygotowany roztwór wylać na saneczki do elektroforezy. Włożyć formę (grzebień), pozostawić do wystygnięcia.



Co powinieneś umieć (sylabus):

  1. Rekombinowanie i klonowanie DNA, analiza i zastosowanie klonowanego DNA.








©absta.pl 2019
wyślij wiadomość

    Strona główna