OZNACZANIE chlorofili i feopigmentow
-
odfiltrowaną na sączkach GF/C lub GF/F zawiesinę umieszczamy w próbówkach szklanych
-
WAŻNE – zapisać objętość przefiltrowanej wody
-
do każdej próbówki dodajemy 5 ml acetonu (90%), delikatnie ucieramy sączek (szklaną bagietką), zamykamy korkiem
-
po 4 godz. ekstrakcji wirujemy próbki (10 min, 3500 obr./min)
-
klarowne próbki przenosimy kolejno do kuwety szklanej (1cm) i oznaczamy przy 4 długościach fal (750nm, 665nm, 647nm, 630nm)
-
do kuwety z próbką dodajemy 0,1 ml (kropla) 0,1M kwasu solnego, odczekujemy 1 min. i oznaczamy ponownie przy dwóch długościach fal 750nm oraz 665nm
UWAGI:
-
zerujemy na acetonie,
-
absorbancja dla 750nm >0,010 wskazuje na mętność próbki i należy ją ponownie odwirować,
-
absorbancje maleją w kolejności 665, 647, 630 – inna kolejność jest błędna,
Wyliczenie stężenia chlorofilu a (chl a), chlorofilu b (chl b), chlorofilu c (chl c) oraz feofityny (feo) odbywa sie w oparciu o wzory empiryczne.
Ca = 11,85 (Abs665 – Abs750) – 1,54 (Abs647 – Abs750) – 0,08 (Abs630 – Abs750)
Cb = 21,03 (Abs647 – Abs750) – 5,43 (Abs665 – Abs750) – 2,66 (Abs630 – Abs750)
Cc = 24,52 (Abs630 – Abs750) – 1,67 (Abs665 – Abs750) – 7,60 (Abs647 – Abs750)
W poniższych wzorach:
a – wartość absorbancji po zakwaszeniu HCl
o- wartość absorbancji przed zakwaszeniem HCl
Cżywy=26,7((Abs665o – Abs750o) – (Abs665a – Abs750a))
Cfeofityna =26,7 (1,7 (Abs665a – Abs750a) – (Abs665o – Abs750o))
gdzie:
C Chl [mg/m3]
v – objętość acetonu [cm3],
V – objętość przefiltrowanego roztworu [dm3],
l – długość kuwety [cm].
Na przykład:

|