Ćwiczenie 5 T: Diagnostyka koagulologiczna



Pobieranie 18.55 Kb.
Data02.05.2016
Rozmiar18.55 Kb.
Ćwiczenie 5

T: Diagnostyka koagulologiczna

Zagadnienia teoretyczne:

Czynniki krzepnięcia. Proces krzepnięcia. Osoczowy układ krzepnięcia – szlak wewnątrzpochodny, szlak zewnątrzpochodny.



Ćwiczenie praktyczne:

Oznaczanie czasu protrombinowego (PT) - metodą manualną i automatyczną, czasu częściowej tromboplastyny po aktywacji (APTT) – metodą automatyczną. Oznaczanie liczby płytek metodą komorową.



  1. Oznaczanie czasu protrombinowego (PT)

Aparatura i sprzęt laboratoryjny:

  • koagulometr OPTION

  • łaźnia wodna

  • pipety automatyczne o pojemności 0,10 cm3, 0,20 cm3

  • probówki szklane

  • naczyńka pomiarowe do koagulometru

  • stoper

Materiał badany i odczynniki:

  • osocze cytrynianowe

  • odczynnik THROMBOPLASTIN PT-S (źródło czynnika tkankowego i wapnia)

  • osocze kontrolne

Wykonanie:

  1. Metoda manualna

  • ogrzać odczynnik THROMBOPLASTIN PT-S do temperatury 37°C

  • do probówki umieszczonej w łaźni wodnej o temperaturze 37°C odmierzyć pipetą 0,1 mL badanego osocza – ogrzewać w ciągu 2 minut

  • dodać 0,2 mL odczynnika THROMBOPLASTIN PT-S do badanego osocza i jednocześnie włączyć stoper

  • przechylając probówkę mierzyć czas powstania skrzepu – zanotować

  • powtórzyć oznaczenie

  • wykonać oznaczenie w osoczu kontrolnym (2-krotnie)

  1. Metoda automatyczna

  • ogrzać odczynnik THROMBOPLASTIN PT-S do temperatury 37°C

  • umieścić naczyńko pomiarowe w dwóch gniazdach pomiarowych koagulometru, w każdym z nich umieścić po jednej metalowej kulce z dozownika

  • do każdego naczyńka odmierzyć pipetą 0,1 mL badanego osocza – ogrzewać w ciągu 1 minuty

  • dodać 0,2 mL odczynnika THROMBOPLASTIN PT-S do badanego osocza

  • zanotować czasy powstania skrzepu

  • wykonać oznaczenie w osoczu kontrolnym

Obliczenia (oddzielnie do metody manualnej i automatycznej):

  • obliczyć średnie z dwóch oznaczeń

  • wyznaczyć wskaźnik INR dla badanych próbek:

INR = RISI

R = PT osocza badanego / PT osocza kontrolnego

R – współczynnik czasu protrombinowego

ISI – międzynarodowy wskaźnik czułości tromboplastyny




  1. Oznaczanie czasu częściowej tromboplastyny po aktywacji (APTT)

Aparatura i sprzęt laboratoryjny:

  • koagulometr OPTION

  • łaźnia wodna

  • pipety automatyczne o pojemności 0,10 cm3, 0,20 cm3

  • probówki szklane

  • naczyńka pomiarowe do koagulometru

  • stoper

Materiał badany i odczynniki:

  • osocze cytrynianowe

  • odczynnik APTT-P-REAGENT

  • chlorek wapnia 0,025 M

  • osocze kontrolne

Wykonanie:

  1. Metoda automatyczna

  • ogrzać chlorek wapnia do temperatury 37°C

  • umieścić naczyńko pomiarowe w dwóch gniazdach pomiarowych koagulometru, w każdym z nich umieścić po jednej metalowej kulce z dozownika

  • do każdego naczyńka odmierzyć po 0,1 mL badanego osocza

  • dodać po 0,1 mL odczynnika APTT-P-REAGENT do badanego osocza i jednocześnie włączyć stoper

  • inkubować przez 5 minut w 37°C (czas aktywacji)




  1. Oznaczanie płytek krwi metodą komorową

Aparatura i sprzęt laboratoryjny:

  • mikroskop

  • komora Burkera

  • pipety automatyczne o pojemności 0,02 cm3, 1,00 cm3

  • probówki Eppendorf

Materiał badany i odczynniki:


Wykonanie:

  • rozcieńczyć dobrze wymieszaną krew płynem rozcieńczającym krwinki płytkowe (100-krotnie) – wymieszać 2 mL płynu z 20 L krwi

  • dobrze wymieszać i pozostawić na 20 minut

  • ponownie wymieszać i napełnić komorę Burkera

  • komorę pozostawić na 20 minut w wilgotnej komorze

  • policzyć płytki na powierzchni 36 prostokątów i 39 malutkich kwadracików (= 3 wąskie paski siatki)

Obliczenia:

Liczba płytek krwi/L = n ∙ 2200



n – suma policzonych płytek







©absta.pl 2019
wyślij wiadomość

    Strona główna